SC∕T 7234-2020 白斑综合征病毒(wssv)环介导等温扩增检测方法(水产)
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ID： |
66D72F7A09DB4C5793810FB82B89CE2E |
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文件大小(MB)： |
0.38 |
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页数： |
9 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-29 |
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ICS 65.020.30,B 41 ←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/ T 7234-2020,自斑综合征病毒(WSSV)环介导等温,扩增检测方法,Detection method by loop-mediated isothermal amplification for,white spot syndrome virus,2020 - 08 - 26 发布2021 - 01 - 01 实施,中华人民共和国农业农村部发布,4:标ifllll ::ê l 叫水产标月1 化技术委员会的M;j TC 15G)V 111 ,本标/fI ;也非单位中同水产科学研究院此均水产研究所,;j，标i(ì 主要起tit 人，& {;If , 'JlEJ.k 利、邱元、徐如怖、采松文、))1皮饭、梁也、杨冰、~J，-L,SC/T 7234- 2020,SC/T 7234- 2020,自斑综合征病毒( WSSV ) 环介导等温扩增检测方法,1 范围,牛;标ìfi' ~古1-1:\ -( I~I 且综合m 病自( W SSV) 到、介导甘lhit4t ltl~l检测所;tlJL式剂和材料、器材和设备、做竹tP.!郎,平1I ~，'i* J'rl定的要求,本标ì1 ì ill川干I~I 且I综合1JFM íH ,2 规范性引用文件,儿是不在HJ别的'11 JTI,GB/T 28630. 2,3 缩略i吾,4,4. 1,4. 2 引物,WSSV-B3,5,20 I"mol / I. , - 20oC,WS~可V-Bl P ， 5 ',l‘ 3' ， 20 μmol / I. ， →,4.3 IOX Isothcrmnl Ampli,50 mmol/ I. KCI , 1O mmol / I. (N H,1' 1'液,AAC 八i\ A C丁c CC丁,1村合20 ml11ol/ 1. ?‘ ri ,-HCI,ween@ 20 ，或其他等放等由it :JtJti~{级,4.4 dNTP (各20 11111101 / 1 . ) ，合dATP 、dTTP ,dCTP ， dCTP 各20 I11 m ol / l.，校附录A ", A. 1 n~ 规定执,行， 一20 0C 保存，虽if 免反织泊、融,4. 5 甜菜碱( 13cta i nc) ，浓lJt 5 mo l/ L ，按A. 2 的*.!ií;ì二执行， - 20 oC 保存，避免反复冻融,4.6 !ìf，EII主馁(MgSO.， ) 。浓度1 00 ml11ol / l., - 20 oC 保存,4.7 Hsl DNA ~合同t 浓皮8 U / f1 I. ， - 20 0C {且在,4 8 核酸染料: 20 X Eva Creen ，前lliI化试开rJ， 4 oC 似布，或使)11其他句:效试剂,4. 9 阳性开J!!I! 1J 已失11感染W SSV 目rC R 生古果显7J~ rYI J~ 11/] n 的~，j' ~rl' 组织， - 200C{!tl{( o,4. 10 阴怕:对!!自为已知l未感染WSSV 且PCR 结果恨不四l 怕的对~rl'组织， - 20 oC 似存,4. 11 空白对!!H为灭茵的去离子水,SC/T 7234- 2020,5 器材和设备,5. 1 微士rl 移浓郁,5.2 Tk\ 心相L o,5. 3 手:在型离心机,5. 4 普i函冰箱,5.5 - 20 0C 低jIll冰箱,5. 6 涡)此振荡节日,5. 7 'jJ I.j R :J~定挝PCR 仪,6 操作步骤,6. 1 样品准备,样J,6. 2 样品核酸提取及变性,6.2 1 样品核酸提取按G I3(1、28630 . 2-20] 2 '1.' 6. 3 的规定执行，也可采用等同放梨的商品化试剂盒,6. 2.2 t生般jJ{ ~K完成后稀释为1 50 n g/μ L~200 ng/ I' L ，~ 10 I" L 分装于0 . 2 mL PCR 它叫' :t[ 95 0C 条例,下保站i\ 5 min ，然后迅速冰浴,6.3 LAMP 检测,6 3. 1 反应体系自己制,按表1 的要求配11叫LAMP 检测反应体系，沼匀后， 分装为24 μ L/管;同11>1设W E;三l二l 对!!司、阴性对HH 布I,lilltl'对!惯。}111 t'f.Tlij按空白x.j !!明、阴怕对!!但、纠检样品、IIR性对!!白的队:J于分J! IJ JlII入J 1"" 、总盐为1 0 ng~ lOO ng,(1忡卫板。f斗检样，'，'，'， DNA íJilJ 价见6. 2 0 反应体系配1"'J须在冰众上进行， 务必侦试齐11及反应饱含物有一操作H才,处HLI泪状态,表LAMP 反应预混物所需试剂,i式剂)111料:l，k' f-L L,IOX 1抽lhcrm日! Ampliricillion l3uffcr 2. 5,MgSO, ( 100 mmol/Ll 1. 0,BClainc (5 Tllol/ I.) 6. 0,dNTP ( 轩20 1111l10l!U 1. 75,WSSV-FIP (20 /,mol / l.) 2. 0,WSSV-1l1P ( 20 μ mol / l.) 2. 0,WSSV F:l ( 10 /,mol / l.) 0. 5,IVSSV-1l3 ( 1 0 μmo l/ I. ) 0. 5,Hsl DNA ~合酌(H UIμ 1.) 1. 0,Eva Crccll (25 /lIllOI!U 0.8,/K 5……
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